Коронавирусная инфекция COVID-19 стала источником глобальной пандемии, вызвав огромное количество заболевших и унесших жизни. Для контроля распространения вируса и разработки соответствующих стратегий лечения и вакцинации, важно определить наличие IgG-антител у людей, переболевших COVID-19.
IgG-антитела являются одним из основных классов антител, которые образуются в организме в ответ на инфекцию. Определение наличия этих антител позволяет установить, был ли человек ранее заражен коронавирусом и приобрел ли он иммунитет к повторной инфекции.
Существует несколько методов для определения наличия IgG-антител при коронавирусной инфекции. Один из них — иммуноферментный анализ (ИФА). Этот метод основан на взаимодействии антител с антигенами, которые присутствуют в образцах пациента. ИФА обычно проводится на планшетах, где находятся фрагменты вирусных белков или специфические антитела к ним, которые связываются с IgG-антителами.
Другим методом является иммунохроматографический анализ (ИХА). В ИХА применяются нитевидные полоски с различными реагентами, которые образуются при взаимодействии антител с антигенами. ИХА является более простым и быстрым методом, который может быть использован для экспресс-тестов на наличие IgG-антител у больших чисел пациентов.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Принцип работы ИФА заключается в том, что на специальные тест-полоски или микротитровые пластинки наносятся вирусные антигены. Затем кровь пациента смешивается с этими антигенами. Если в крови присутствуют IgG-антитела к коронавирусу, они свяжутся с антигенами и образуют иммунные комплексы.
Далее проводится детекция образовавшихся иммунных комплексов. Для этого на поверхность тест-полосок или микротитровых пластинок добавляется фермент, например, пероксидаза. Затем добавляется специальный субстрат, который взаимодействует с ферментом и превращается в окрашенное вещество.
Если на тесте образуются иммунные комплексы, фермент на поверхности тест-полосок или микротитровых пластинок будет изменять цвет. Интенсивность окрашивания зависит от количества образовавшихся иммунных комплексов и, следовательно, от наличия IgG-антител в крови пациента.
Определение наличия IgG-антител при коронавирусной инфекции COVID-19 с помощью ИФА является точным и надежным методом. Он позволяет выявить иммунный ответ на вирус и определить степень защиты организма от повторной инфекции.
Латекс-агглютинационный тест (ЛАТ)
Этот метод основан на использовании латексных частиц, которые покрываются антигенами, специфичными для вируса SARS-CoV-2. Если в пробе крови присутствуют IgG-антитела к вирусу, они связываются с антигенами на латексных частицах, что приводит к их агглютинации (склеиванию).
В результате агглютинации латексных частиц образуется макроскопическая или микроскопическая заметная реакция, что позволяет определить наличие IgG-антител в пробе крови.
Основным преимуществом ЛАТ является его быстрота и простота выполнения. Однако данный метод не всегда обладает достаточной чувствительностью и специфичностью. Поэтому результаты ЛАТ требуют подтверждения с помощью других более точных методов, таких как иммунофлуоресцентный анализ или иммунохроматографические тесты.
Латекс-агглютинационный тест является важной дополнительной методикой для определения наличия IgG-антител при коронавирусной инфекции COVID-19, которая позволяет быстро получить предварительные результаты и провести скрининг большого количества образцов крови на наличие антител.
Иммунохроматографический тест (ИХТ)
Иммунохроматографический тест считается качественным и простым в использовании методом диагностики. Он основан на принципе сопряжения основного антитела, специфичного к IgG-антителам коронавируса, с подложкой тест-зоны. Подложка обычно содержит золотые коллоидные частицы, помеченные антителами к IgG. Если в образце присутствуют IgG-антитела, они свяжутся с маркированными частицами и образуют видимую линию на тест-зоне.
Для проведения ИХТ необходимо взять небольшое количество крови, сыворотку или плазму пациента и добавить их на тест-полоску. Затем следует добавить раствор буфера, который стабилизирует реакцию. Через несколько минут результат можно оценить по наличию или отсутствию видимой линии на тест-зоне. Если видимая линия присутствует только в контрольной зоне, а линия на тест-зоне отсутствует, то результат теста положительный, что указывает на наличие IgG-антител при коронавирусной инфекции COVID-19.
Иммунохроматографический тест является быстрым и визуальным методом диагностики IgG-антител при коронавирусной инфекции COVID-19. Он отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Этот метод диагностики может быть эффективным инструментом для скрининга на наличие IgG-антител и определения иммунитета человека к коронавирусу SARS-CoV-2.
Реакция полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ПЦР-метод основан на специфическом умножении и продукции целевой ДНК или РНК методом бесконечных циклов обратной транскрипции и днк-амплификации. В случае коронавируса COVID-19, в ПЦР используют примеси, специфические для вируса, которые позволяют определить наличие его генетической информации в образце.
Первым этапом в ПЦР-анализе является извлечение вирусной ДНК или РНК из образца, такого как носовые или горловые смывы. Затем полученная ДНК или РНК подвергается обработке специфическими праймерами, которые распознают и соединяются с целевыми регионами генома вируса.
После этого проводится обратная транскрипция, в ходе которой из РНК делается ДНК, и последующая днк-амплификация с использованием фермента термостабильной полимеразы. Количественное определение амплифицированных генетических фрагментов может быть получено с помощью детекции флуоресцентных меток или применения гелевой электрофореза.
ПЦР-метод позволяет выявить наличие генетической информации о коронавирусе в образцах, что свидетельствует о наличии IgG-антител у пациента, в реакции на воздействие вируса. Этот метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что делает его незаменимым в молекулярной диагностике COVID-19.
Элайза (ELISA) анализ
ELISA анализ проводится в несколько этапов. Сначала на поверхность тестовой пластины, обычно из полистирола или полипропилена, наносят антигены коронавируса. Затем, добавляют пациентскую кровь, которая при наличии IgG-антител связывается с антигенами.
Далее, добавляют маркерные антитела, которые связываются с IgG-антителами из пациентской крови. Эти антитела могут быть размечены ферментом, таким как пероксидаза или алкалиновая фосфатаза, что позволяет их детектировать при помощи химической реакции.
Чтобы увидеть результаты анализа, проводят окрашивание пластинки, которое изменяет цвет и степень окрашивания планок, содержащих антитела. Чем больше антител в пациентской крови, тем сильнее окрашены планки. Результат анализа интерпретируется как положительный или отрицательный в зависимости от степени окрашивания.
ELISA анализ является высокочувствительным и специфичным методом определения наличия IgG-антител при коронавирусной инфекции COVID-19. Этот метод широко используется в клинической практике для диагностики и контроля этиологической обстановки пандемического инфекционного заболевания.
Иммуносенсорные методы
Наиболее распространенными иммуносенсорными методами являются иммунохроматографические тесты (Ленточные тесты), которые основаны на принципе антиген-антитело. В этих тестах антигены SARS-CoV-2 наносятся на полоску из акриламида или нитроцеллюлозы, пропитанную конъюгатом антител-ферментного комплекса. В случае присутствия IgG-антител в образце, происходит образование комплекса антиген-антитело-фермент, что приводит к окрашиванию области с положительным результатом.
Другими иммуносенсорными методами являются иммуноэлектрохимические и иммуномагнитные методы. В иммуноэлектрохимических методах используется электрохимическое детектирование специфического взаимодействия антител и антигенов с помощью электрода. Иммуномагнитные методы основаны на использовании наночастиц с магнитными свойствами, которые могут быть функционализированы антителами и использованы для захвата и детектирования антигенов SARS-CoV-2.
Иммуносенсорные методы обладают низкой стоимостью, простотой использования и скоростью получения результатов, что делает их привлекательными для массового скрининга наличия IgG-антител при коронавирусной инфекции.